MagVigen™ Saliva DNA Extraction Kit

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产品内容

• MagVigen唾液DNA捕获纳米颗粒
• 唾液溶解缓冲液
• 蛋白酶K
• 蛋白酶K缓冲液
• 清洗缓冲液1原液
• 洗脱缓冲液

所需材料

• 异丙醇
• 乙醇
• 十二烷基硫酸钠，16%
• 磁性架(NVIGEN目录号A20006)

注意:
MagVigen唾液DNA捕获试剂盒(K61009)可以从唾液样本中捕获DNA (>30bp)。

协议

1. 准备唾液样本:如果使用冷冻唾液，在室温下融化。将唾液以10000x离心10分钟，以去除任何沉淀。




2. 制备裂解缓冲液:如果有固体，在60℃加热几分钟，形成澄清溶液。




3. 制备蛋白酶溶液:向蛋白酶K小瓶中加入蛋白酶K缓冲液。涡旋混合均匀。储存于-20°c




4. 准备清洗缓冲液1:根据表1计算所需的量。向每550 μl清洗缓冲液1储备液中添加450 μl异丙醇。每次都要做缓冲。




5. 检查表1中的试剂使用情况。




6. 将蛋白酶K溶液加入样品管底部，将320 μl唾液样品加入管中，将80μl 1x PBS加入管中。涡旋5秒钟，以充分混合，短暂旋转。




7. 向试管中加入16% SDS。涡旋5秒钟，以充分混合，短暂旋转。




8. 向试管中加入唾液溶解缓冲液。涡旋1分钟以充分混合。短暂降速。在60°C的水浴中孵育30分钟。




9. 添加MagVigen唾液DNA捕获纳米颗粒。轻轻摇动小瓶使其分散。然后加入异丙醇，涡旋混合均匀，短暂减速，并保持低速至中速涡旋45分钟。




10. 将反应管放在磁性架上，沉淀珠子，直到溶液澄清(大约10分钟，取决于磁体的强度和样品体积)。




11. 慢慢去除上层清液。注意不要拿走任何珠子，尽可能多地取出溶液。轻敲固体表面上的磁性架，使残留溶液沉淀到试管底部，去除所有上清液。




12. 从磁铁上取下试管，加入清洗缓冲液1。通过移液或涡旋混合。短暂降速。在磁性架上沉淀珠子(约10分钟)，去除上清液。在表面上轻敲磁架。除去所有上清液。

    
    注意:

    不需要*全分散珠子。用移液器吸头尽可能分散就可以了。




13. 使用80%的乙醇清洗珠子沉淀。不需要*全分散珠粒。稍微向前和向后倾斜磁性架，使样本管留在磁性架上。然后短暂旋转，使盖子中没有溶液残留。在磁性架上沉淀珠子(约3分钟)，并去除所有上清液。轻敲固体表面上的磁性架，将上清液残渣沉淀到试管底部。除去所有上清液。




14. 使用80%乙醇再次清洗珠子沉淀。沉淀珠子(~ 2-3分钟)并去除所有上清液。




15. 将试管留在磁性架上，风干沉淀以蒸发所有乙醇。这需要2-3分钟。




16. 向珠子中加入所需量的洗脱缓冲液，上下吸取，直到所有沉淀*全重新分散。将珠子分散在洗脱缓冲液中3分钟。




17. 短暂降速。然后将试管放在磁性支架上5分钟。




18. 在不干扰磁珠沉淀的情况下收集上清液。上清液含有提取的DNA。移出DNA溶液进行下游实验时，将试管放在磁铁旁边。如果不立即使用，提取的DNA溶液可以储存在-20℃下。

表1。每个步骤中使用的试剂体积。

MagVigen™ Saliva DNA Extraction Kit