MagVigen™ FFPE DNA Extraction Kit

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产品内容

• mag vigen FFPE DNA捕获纳米颗粒
• 组织溶解缓冲液
• 蛋白酶K
• 蛋白酶K缓冲液
• 清洗缓冲液1原液
• 洗脱缓冲液

所需材料

• 异丙醇
• 乙醇
• 磁性架(NVIGEN目录号A20006)

协议

• 注意:




• 使用您自己的方案去除FFPE样本中的石蜡。
• 检查组织溶解缓冲液，确保没有沉淀。如果有，加热到40°C使其溶解。

1. 制备清洗缓冲液1溶液:

   
   

   根据表1计算所需的清洗缓冲液1的量。向每500微升清洗缓冲液1储备溶液中加入500微升异丙醇。




2. 制备蛋白酶K溶液:

   
   

   向装有蛋白酶K的试管中加入蛋白酶K缓冲液。轻轻搅拌直至蛋白酶K溶解。将蛋白酶K溶液储存在-20°C的冰箱中。




3. 向FFPE样品中加入200μl或400μl的细胞溶解缓冲液。遵循表1中的试剂体积。




4. 向试管中加入准备好的蛋白酶K溶液，轻轻涡旋以充分混合，并在55°C下孵育30分钟，冷却至室温。




5. 在80°C下孵育15分钟，然后冷却至室温。




6. 向裂解缓冲液中加入MagVigen DNA捕获纳米颗粒。涡旋混合均匀。




7. 向裂解反应中加入异丙醇，涡旋混合

   
   

   在室温下孵育45分钟。




8. 将反应管放在磁架上沉淀珠子，直到溶液澄清(约10分钟)。




9. 慢慢去除上层清液。注意不要拿走任何珠子，尽可能多地取出溶液。




10. 从磁铁上取下试管，加入清洗缓冲液1。通过移液或涡旋混合。短暂旋转，使溶液到达试管底部。在磁性架上沉淀珠子，直到溶液澄清(大约3分钟)，然后取出溶液。




11. 加入洗涤缓冲液2 (80%乙醇)，通过移液混合。短暂旋转，使溶液到达试管底部。在磁性架上沉淀珠子，等到溶液澄清后取出溶液。




12. 重复步骤11，用80%乙醇再清洗一次。




13. 将试管放在磁性架上，风干颗粒约1分钟。




14. 向珠子中加入所需量的洗脱缓冲液，上下吸取，直到所有沉淀全重新分散。




15. 将试管放在磁性支架上1分钟。




16. 小心地从微量离心管底部收集上清液，不要扰动沉淀。上清液含有提取的DNA。

表1。每个步骤中使用的试剂体积。

MagVigen™ FFPE DNA Extraction Kit