MagVigen™ Whole Blood, PBMC or Cell Genomic DNA Extraction Kit

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产品内容

• mag vigen DNA捕获纳米颗粒
• 裂解缓冲液
• 洗涤缓冲液
• 洗脱缓冲液
• 蛋白酶K溶液

需要但不包括的材料

• 磁性架(NVIGEN目录号A20006)
• 异丙醇(分子生物学级)
• 乙醇(200度)
• 美国公共广播公司

协议

注意:

• 制备清洗缓冲溶液:在每550 μl清洗缓冲储备液中加入450 μl异丙醇，制成清洗缓冲液。
• 使用前充分涡旋珠子。
• 以下方案使用150 μl作为提取起始体积。对于其他体积，请按比例缩放每个步骤中使用的试剂。

1. 将150 μl样品转移到1.5ml Eppendorf试管中。如果样品量较少，加入PBS补足体积。对于全血样品，即从60 μl或75 μl样品开始，用等体积的PBS稀释。




2. 加入5 μl蛋白酶K溶液，加入150 μl细胞裂解缓冲液。轻轻混合均匀，并在55℃下孵育30分钟




3. 向裂解缓冲液中加入5μl MagVigen DNA捕获纳米颗粒。涡旋混合均匀。向裂解反应中加入300 μl异丙醇，涡旋混合。室温下孵育20分钟。




4. 将样本管放在磁性架上沉淀珠子，直到溶液澄清(约5分钟)。慢慢取出并丢弃上清液。注意不要带走任何珠子，尽可能多地移除溶液。




5. 从磁铁上取下样本管，加入150 μl清洗缓冲液。通过移液或倒置混合。短暂旋转，使溶液到达试管底部。在磁性架上沉淀珠子，直到溶液澄清(大约1-3分钟)，然后去除上清液并丢弃。




6. 添加150μl 80%乙醇(清洗2)，通过移液混合。短暂旋转，使溶液到达试管底部。在磁性架上沉淀珠子，等到溶液澄清，去除上清液并丢弃。




7. 重复步骤6，用80%乙醇再次清洗(清洗3)。




8. 将样本管放在磁性架上，风干颗粒约1分钟。




9. 向珠子中加入50 μl洗脱缓冲液，并充分混合。室温下孵育1分钟。




10. 将样本管放置在磁性支架上1-2分钟。小心地从Eppendorf管底部收集洗出液，不要扰动沉淀。




11. 重复步骤9和10进行另一次洗脱。洗出液含有提取的DNA。

注意: 对于要求高样品清洁度的下游应用，将样品放在磁铁旁边，以消除残留珠子的可能性。

表1。每个步骤中使用的试剂体积。

MagVigen™ Whole Blood, PBMC or Cell Genomic DNA Extraction Kit