squarix探针和染料——RPA产品信息

RDA 用作生物样品中 Fe 2+的选择性高量子产率荧光标记物。它对铁的亲和力比 RPA 略低。膜渗透性化合物的阳离子荧光团允许通过例如荧光显微镜进行观察，并且基于线粒体的负膜电位，尤其靶向活细胞的线粒体。在无细胞系统中，RDA 荧光（λ最大598 nm）会被 Fe 2+离子以化学计量（3:1）强烈猝灭。

A:无细胞系统中 RPA 的吸收和发射光谱（“简单缓冲溶液"(SBS) 中的 20 µM RPA：2mM 抗坏血酸、0.15% SDS 和 10mM Tris/HCl，pH 8.2）。

B:Fe 2+对“SBS"中 RPA (20-45 µM) 荧光的影响：Fe 2+是随着硫酸亚铁铵/脱水柠檬酸三钠盐 (FAS) 浓度的增加而从添加的储备溶液 (1mM) 中添加的。含有 20mM 抗坏血酸，与培养基混合。 2 分钟后，RPA/Fe 2+复合物形成后，测定含有已知浓度的 RPA 和 Fe 2+的培养基部分的荧光（以任意单位 au 表示）。零荧光等于不含染料的介质的荧光。

RDA 选择性地积聚在细胞（例如培养的肝细胞）的线粒体中(1,2)。当铁以透膜形式添加到细胞中时，线粒体内 RDA 荧光会被猝灭。当添加膜渗透性过渡金属螯合剂吡哆醛异烟酰腙和 1,10-菲咯啉后，实验性地减少线粒体可螯合铁时，它会增加。 RDA 荧光的增加允许使用异位校准对活细胞中的线粒体可螯合铁进行特异性定量(1)。

Application in a cellular system

RDA 可以按照 Lit 中的描述使用。 1. 例如，在盖玻片上培养的活细胞与 RDA（0.01-10 µM，由 DMSO 中的 10 µM 或 1-5 mM 储备溶液制备）在 HBSS（“Hanks 平衡"）中于 37°C 孵育 10-20 分钟盐溶液"）。随后用无染料 HBSS 洗涤细胞 3 次。为了避免 RPA 与腔室结合并改善线粒体负载，应在 RPA 负载后将细胞转移到第二个（无指示剂）Pentz 腔室并再孵育 15 分钟。 37°C。现在应在 37°C 下用适当的培养基（例如用于肝细胞的 HBBS 或 L-15 培养基）覆盖细胞。使用例如定量激光扫描显微镜测定线粒体内RPA荧光。 RPA 的红色荧光在 λ exc 处被激发。= 543 nm 并通过 λ exc 附近的长通滤波器收集。 = 601 纳米。定量和定性测量的扫描参数取决于实验所用的显微镜系统。测量开始后 5-10 分钟，可通过添加 FeCl 3 /8-羟基喹啉复合物 (5-15 µM) 或膜渗透铁螯合剂，例如 PIH（吡哆醛异烟酰腙，2mM）来控制线粒体内可螯合铁的水平。 ) 或 1,10-菲咯啉 (2 mM)。对于对照测量，平行培养物加载含有一些荧光团的铁不敏感对照 RPAC（罗丹明 B-[（菲-9-基）氨基羰基]苄酯）。应使用与上述相同的负载条件。

分子分子式:C ₄₈ H ₄₄ BrN ₅ O ₄

分子量 [克/摩尔]:834.7981 (79.9045+754.8935)

最大吸收:λ max (log ε) = 562 nm (4.95), 510-535

最大排放量:最大波长601 nm

稳定:< 4 ^o C，干燥避光保存

外貌:紫色固体

纯度:97%+（1 H NMR，500 MHz）

淬火化学计量:RPA/Fe 2+ : 3:1 [摩尔/摩尔]

体外毒性:无毒