最规则和带电的肽
要确定溶解肽的合适方法,请仅使用少量合适的溶剂。将肽溶解在蒸馏水或去离子无菌水中(如果可能,无氧)。只有当肽溶解后,才应添加所需的缓冲盐/溶液,并将溶液稀释至最终浓度,即先溶解肽,然后添加缓冲液。
肽溶液中可能发生细菌降解。
始终使用无菌水溶解肽。
如果需要,可以通过 0.45 um 或 0.2 um 过滤器过滤肽溶液。不要将肽溶液保存在室温下。
半胱氨酸、蛋氨酸或色氨酸等氨基酸容易氧化,应溶解并储存在无氧水中。这可以通过在减压下通过保留惰性气体如氮气、氦气或氩气进行脱气来制备。
如果肽不溶于纯水,超声处理可能有助于分解任何颗粒并提高溶解速度。
注意:超声处理会导致溶液升温和肽降解。
对于高碱性肽
如果肽含有许多碱性氨基酸(K、R 等),请使用乙酸水溶液(1 至 10%),并进行或不进行超声处理。对于疏水性很强的肽,请使用 50% 乙酸水溶液。
对于高酸性肽
如果肽含有许多酸性氨基酸(E、D 等),请使用氨水溶液(1 至 10%)或挥发性碱性缓冲液(pH 高达 8),例如 N-乙基吗啉乙酸盐或碳酸氢盐,并进行或不进行超声处理。色谱分析前可能需要调整 pH 值。
丙醇或乙腈可用于溶解一些中等大小的肽。如果要将肽注射到柱上,有机溶剂尤其是丙醇的用量必须保持少量,否则保留时间将受到很大影响。
对于高疏水性肽
如果肽具有高度疏水性,具有芳香族或烃类侧链,例如 Val、Leu、Ile、Met、Phe、Try、Ala,或者如果肽是中性,则使用离液剂,例如 DMF/D">
a。高浓度离液盐可通过破坏二级结构来帮助溶解肽。
b.离液剂适合制备用于分析的溶液,但可能会干扰用于肽研究的生物系统
C。滴加 DMF 或 DMSO(最多 30%)直至肽溶解。
d.在反相色谱中,DMF 将与缓冲液前沿一起洗脱。峰值可能会很高,具体取决于注射量。大多数肽的保留时间比大的 DMF 峰洗脱所需的几分钟要长。如果肽非常小并且洗脱较早,则注射肽时可能必须降低起始百分比。
冻干肽的储存
所有肽均应冷藏保存,最好在 -20 ℃ 下保存,以获得最大稳定性。大多数肽在 -20 ℃ 以下储存时将保持稳定数月。这适用于许多氨基酸衍生物、脂质、酶和其他蛋白质以及肽。例外是固定化蛋白质和肽。
使用冷藏产品时,应将瓶子或小瓶加热至室温。打开前放入装有新鲜干燥剂的干燥器中。从 -20 ℃ 起,这可能需要一个小时或更长时间,具体取决于包装尺寸。如果不这样做,打开瓶子或小瓶时可能会导致产品上形成冷凝,并会大大降低材料的稳定性。打开后,应称出所需数量以防止吸水。对于某些吸湿性肽来说,这是一个特殊的问题。
溶液中肽的储存
溶液中的肽比冻干肽稳定性差得多。为了获得最佳结果,请遵循以下准则。
1. 避免反复解冻和冷冻。建议将储备溶液等分。只解冻需要的部分。请勿储存稀释溶液。
2. 为了获得最大的稳定性,请在 -20 ℃ 下储存在无菌、pH 5 至 7 的缓冲溶液中。
3. 半胱氨酸、蛋氨酸或色氨酸等氨基酸容易氧化,应溶解或保存在无氧水中。
4. 细菌污染会降解肽,因此请使用无菌水或缓冲液。