世界各地实验室中常用的过程之一是电泳，但很多人仍然对该过程及其工作原理存有疑问。电泳是一个复杂的过程，但对于实验室研究至关重要。电泳是一种实验室技术，用于根据大小分离DNA、RNA和蛋白质等分子。凝胶电泳通过施加电流促进带电分子通过凝胶的迁移。当电流施加到凝胶上时，凝胶中的颗粒根据其电荷进行迁移。带负电的颗粒从带正电的颗粒移动到凝胶的另一端。较小的分子比较大的分子迁移速度更快，因此电泳可以根据大小分离分子。此过程在各种实验室应用中至关重要。它使研究人员能够区分不同大小的DNA...

裂解缓冲液：为了准备在凝胶上运行的样品，需要裂解细胞和组织以释放感兴趣的蛋白质。这会溶解蛋白质，使它们可以单独迁移通过分离凝胶。我们使用RIPA缓冲液(beyotimeP0013B)来提取全细胞提取物和膜结合蛋白。蛋白酶和磷酸酶抑制剂：一旦发生裂解，蛋白水解、去磷酸化和变性就开始。如果样品始终保存在冰上或4°C下，并且将适当的抑制剂新鲜添加到裂解缓冲液中，这些事件可以大大减慢。Pmsf是我们经常使用的蛋白酶抑制剂。组织裂解液的制备用干净的工具解剖感兴趣的组织，最好在冰上，并尽...

抗体验证是关键！以下是应对您的抗体执行的最基本的验证步骤：肽产生的抗体-免疫原验证将肽序列与UniProt数据库进行比对，看看它是否仅与其目标具有同一性。肽序列与免疫原的蛋白质序列之间的同一性为85%或更高的任何蛋白质都可以被该抗体检测到。不幸的是，确切的肽序列并不总是可用，但肽序列周围的氨基酸范围应该是可用的。炸毁该地区也有帮助。所有Biorbyt的免疫原都会被传输回UniProt数据库，以确保它们仅检测到其设计针对的蛋白质。抗体的应用验证如果一种抗体据称适用于蛋白质印迹(...

对于细胞学染色，您实际上是在三种苏木精染色之一之间进行选择：Gill1X苏木精、Gill2X苏木精和Harris苏木精，酸化。以下是您如何为细胞学染色选择最佳苏木精，以及实验室技术人员选择的两种最常见染色的方案。识别细胞学标本中的癌细胞、感染、炎症或其他细胞异常一般来说，渐进式吉尔苏木精适合评估细胞学标本。最常见的是，我们推荐Gill1X，因为它被认为是Gill苏木精染色剂中最浅的染色剂。它可以补充OG和EA染色，而不会过度染色标本。有时，我们发现Gill2X苏木精（例如当您...

分子克隆是分子生物学中用于组装重组DNA分子的一组实验方法。基于质粒的克隆包括59个主要步骤：插入DNA制备载体DNA制备插入片段与载体的连接转化为感受态细胞在下面的示例中，我们将描述如何使用SgfI和MluI将目标插入片段亚克隆到载体中。插入DNA制备对含有插入片段的载体进行限制性消化用相应的限制性内切酶消化含有插入片段的载体DNA。对于我们的示例，使用的限制性位点是SgfI和MluI位点。OriGene拥有全基因组cDNA表达载体。在琼脂糖凝胶上运行消化的插入DNA以检查大...

蛋白质印迹是研究实验室普遍使用的一种技术，用于研究感兴趣的蛋白质。蛋白质印迹用于抗体验证、蛋白质-蛋白质相互作用研究以及许多其他应用。1然而，生成可解释的蛋白质印迹结果可能具有挑战性。以下是一些常见问题以及解决方法。高背景可能是由于尝试这个高抗体浓度使用一抗和二抗进行滴定。包括已知的蛋白质对照。封闭液使用新鲜的封闭液，增加封闭时间/温度，尝试不同的封闭剂。印迹在封闭/洗涤过程中干燥确保膜在封闭和清洗步骤中被充分覆盖。洗得不够增加洗涤次数和洗涤液体积。确保至少洗涤3次，每次5分...