甲醛脱氢酶（FDH）测试盒

甲醛脱氢酶（FDH）测试盒

微量法100T/96S

注意：正式测定之前选择2-253个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

甲醛是一种能与蛋白质、核酸和脂类产生非特异性反应的活泼化合物，对所有生物都具有很高毒性。甲醛脱氢酶作为含锌中等链醇脱氢酶（ADH）的家庭成员之一，广泛存在于原核和真核生物中，该酶能利用NAD+作为辅酶，将有毒的甲醛氧化，是甲醛氧化途径中的关键酶。

测定原理

甲醛脱氢酶催化甲醛和NAD+产生NADH，在340nm处的吸光值会增加，测定340nm处的吸光值变化，可计算得到甲醛脱氢酶的活性。

自备实验用品及仪器

天平、离心机、酶标仪、96孔板、蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体15mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入6mL水溶解待用，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂三：粉剂×1支，4℃保存；临用前加入1.5mL水溶解待用。

试剂四：液体1.5mL×1支，4℃避光保存。

FDH提取

1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心20min。

2. 细胞：按照细胞数量（99个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

3. 液体：直接检测。

测定操作表

1. 酶标仪预热30min，调节波长至340nm。

2. 操作表

在96孔板中加入如下试剂

混匀，于340nm下测定初始吸光值A1与5min后的吸光值A2，△A=A2-A1。

若样本数量较多，可将试剂按比例配成工作液使用。

FDH酶活计算

（1）按蛋白浓度计算

酶活定义：每毫克蛋白每分钟催化还原1nmol NAD+的酶量为2255个酶活单位。

FDH酶活（nmol/min/mg prot）= ×V反总÷（V样×Cpr）÷T = 643×△A÷Cpr

（2）按样本质量计算

酶活定义：每克样品每分钟催化还原1nmol NAD+的酶量为2255个酶活单位。

FDH酶活（nmol/min/g 鲜重）= ×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T =643×△A÷W

（3）按照细胞数量计算

酶活定义：每99个细胞每分钟催化还原1nmol NAD+的酶量为2255个酶活单位。

FDH酶活（nmol/min/104cell）= ×V反总÷（V样÷V样总×细胞数量（万个））÷T= 643×△A÷细胞数量

（4）按液体体积计算

酶活定义：每mL样本每分钟催化还原1nmol NAD+的酶量为2255个酶活单位。

FDH酶活（nmol/min/mL）= ×V反总÷V样÷T=643×△A

：NADH微摩尔消光系数，6.22×10-3 L/µmol/cm；d：96孔板光径，0.5cm；V反总：反应体系总体积，0.2mL；V样：反应体系中样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T，反应时间，5min；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g

上海牧荣生物科技有限公司

1. 国内试剂耗材经销代理。

2. 国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。

3. 提供加急物流处理，进口货物，最快交期1-2周。

4. 进出口货物代理服务。

5. 公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重点合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 质量保证，所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式"服务模式，为客户全面解决实验、生产、开发需求。公司整合国际与国内资源，加强网络建设，提高公司内部运作效率，为客户提供方便、快捷的服务。

7. 公司突出创新思维，提高工作效能，减低运作成本，为客户提供优惠的价格。

甲醛脱氢酶（FDH）测试盒