MagVigen™ – Plasma DNA Capture

产品内容

• MagVigen™ 血浆 DNA 捕获纳米颗粒

• 裂解缓冲液

• 蛋白酶K

• 蛋白酶 K 缓冲液

• 洗涤缓冲液 1 库存

• 洗脱缓冲液

所需材料

• 异丙醇

• 乙醇

• 十二烷基硫酸钠，20%

• 磁性架（NVIGEN Cat# A20006）

MagVigen™ 血浆 DNA 捕获试剂盒 (K61003) 能够从血浆和血清中捕获小的循环游离 DNA (>30bp)。

Protocols

1. 准备血浆样品：如果使用冷冻血浆，请在室温下解冻。将血浆以 12000x g 离心 5 分钟，以去除任何血液和细胞碎片。




2. 制备裂解缓冲液：如果有固体，则在 60°C 下加热几分钟以制成澄清溶液。




3. 制备蛋白酶溶液：将蛋白酶 K 缓冲液添加到蛋白酶 K 粉末瓶中。涡旋混合均匀。储存于-20°C。




4. 制备洗涤缓冲液 1：根据表 1 计算所需量。向每 550 ul 洗涤缓冲液 1 原液中添加 450 ul 异丙醇。每次都新鲜制作缓冲液。




5. 检查表1的总体积来决定使用的离心管类型（1.5ml、2ml、5ml、15ml或50ml）。




6. 将蛋白酶 K 溶液添加到样品管底部，将血浆添加到管中。涡旋 5 秒以充分混合，短暂离心。




7. 将 20% SDS 添加到管中。涡旋 5 秒以充分混合，短暂离心。




8. 将裂解缓冲液添加到管中。涡旋 1 分钟以充分混合。短暂地旋转下来。 60°C 孵育 30 分钟。




9. 添加 MagVigen™ 血浆 DNA 捕获纳米颗粒。轻轻摇动小瓶使其分散。然后加入异丙醇，涡旋混匀，短暂离心，继续涡旋 45 分钟。




10. 将反应管放在磁力架上沉淀珠子，直至溶液澄清（10-20 分钟，具体取决于磁铁的强度和样品体积）。




11. 慢慢除去上清液。小心不要带走任何珠子，尽可能多地除去溶液。将磁力架敲击固体表面，使残留溶液沉降到管底，除去所有上清液。




12. 将管从磁铁上取下，添加洗涤缓冲液 1。通过移液或涡旋混合。如果从较大的 15 或 50 ml 试管开始，请将溶液转移到 1.5 或 2 ml 试管中。短暂地旋转下来。将珠子放在磁力架上沉淀（约 10 分钟），除去上清液。将磁力架敲击表面。除去所有上清液。




13. 使用 75% 乙醇清洗珠粒。不需要全分散珠粒。管子可以通过磁力架保持在适当的位置。稍微向前和向后倾斜装有样品管的磁力架。然后短暂旋转，使盖子中没有溶液残留。将珠子放在磁力架上（约 3 分钟）并除去所有上清液。在固体表面上敲击磁力架，使上清液残留物沉降到管底部。除去所有上清液。




14. 使用 75% 乙醇再次清洗珠粒。将珠子沉淀（约 2-3 分钟）并除去所有上清液。




15. 将管子放在磁力架上，风干沉淀以蒸发所有乙醇。这需要 2-3 分钟。




16. 将所需量的洗脱缓冲液添加到珠子中，上下移液直至所有沉淀物全重新分散。将珠子分散在洗脱缓冲液中 3 分钟。




17. 短暂地旋转下来。然后将管子放在磁力架上 2-3 分钟。




18. 收集上清液，不要干扰磁珠沉淀。上清液含有提取的DNA。吸取 DNA 溶液进行下游实验时，将管子放在磁铁旁边。提取的 cfDNA 溶液如果不立即使用，可保存在 -20°C。

MagVigen™ – Plasma DNA Capture