常用生化试剂Invitrogen 15596-026

常用生化试剂Invitrogen 15596-026

TriZol试剂是一种完整、即用型试剂，可从多种生物样品中分离高质量总 RNA 或同时分离 RNA、DNA 和蛋白。该苯酚和异硫氰酸胍的单相溶液设计用于在一小时内从人、动物、植物、酵母菌或细菌来源的细胞和组织样品中分离 RNA、DNA 和蛋白的单独组分。

TriZol试剂的主要特点包括：

• 可从同一样品中分离 RNA、DNA 和蛋白

• 拥有强的裂解能力，甚至可处理困难的样品类型

• 针对组织、细胞、血清、病毒和细菌进行优化的配方和方案

从多种样品体积和来源中可靠纯化 RNA

TRIzol™ 试剂可很好地处理少量组织 (50–100 mg) 和细胞 (5 × 106) 以及大量组织 (≥1 g) 和细胞 (>107)，且包含用于从人、动物、植物或细菌来源的样品中进行纯化的方案。TRIzol™ 试剂通过在样品均质化期间高效抑制 RNase 活性维持 RNA 的完整性，同时破坏细胞并溶解细胞组分。TRIzol™ 试剂方法的简单性使其可同时处理大量样品。可在不到 1 小时的时间内完成整个程序。通过 TRIzol™ 试剂分离的总 RNA 不含蛋白和 DNA 污染。

其配方可分离多种分子靶标

TRIzol™ 试剂可使您连续沉淀单份样品中的 RNA、DNA 和蛋白。使用 TRIzol™ 试剂均质化样品后，加入氯仿，使匀浆分离成透明的上层水层（含 RNA）、中间相和红色下层有机层（含 DNA 和蛋白）。使用异丙醇从水层中沉淀出 RNA。使用乙醇从中间相/有机层中沉淀出 DNA。通过异丙醇沉淀从苯酚-乙醇上清液中沉淀出蛋白。将沉淀出的 RNA、DNA 或蛋白洗涤以去除杂质，然后重悬以用于下游应用。

产品名称：Invitrogen TRIZOL、Trizol Reagent、一步法总RNA提取试剂

品牌：Invitrogen 

货号：15596026 （100ML）和15596018（200ML）

产品优点：可快速简单地获得高纯度总RNA

保存温度：2-8度

效期：4度保存可2年

用途：TRIZOL试剂纯化的RNA可用于PCR、RNA印迹分析、poly（A）+筛选或斑点杂交。纯化的DNA和蛋白质分别适用于DNA和蛋白质印迹分析。

Invitrogen TRIZOL说明书：

从细胞中提取总RNA 
1） 培养贴壁细胞：不须消化，可直接用Trizol进行消化、裂解，Trizol体积按10cm2/ml比例加入。 
2） 悬浮细胞可直接收集、裂解，每1ml Trizol可裂解5×106动物、植物或酵母细胞，或107细菌细胞。
从组织中提取总RNA 
1）液氮研磨，组织块直接放入研体中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮， 
再研磨，如此三次，按50-100mg组织/mlTrizol加入Trizol，转移入离心管进行第2步操作。 
2） 匀浆：组织样品按50-100mg/mlTrizol 加入Trizol，另外，组织体积不能超过Trizol体积 
的10%，否则匀浆效果会不好，用电动匀浆器充分匀浆约需1-2分钟。 
2．细胞或组织加Trizol后，室温放置5min，使其充分裂解。注：此时可放入-70℃长期保持。 
3．12000rpm 离心5min，弃沉淀。 
4．按200ul氯仿/ml Trizol加入氯仿，振荡混匀15分钟，室温放置15min。注：禁用漩涡振荡器， 
以免基因组DNA断裂。 
5．4℃12000g离心15min。 
6．吸取上层水相，至另一离心管中。 
注：1）千万不要吸取中间界面。 
2）若同时提取DNA和蛋白质，则保留下层酚相存于4℃冰箱,若只提RNA，则弃下层酚相。 
7．按0.5ml异丙醇/ml Trizol 加入异丙醇混匀，室温放置5-10min。 
8．4℃ 12000g离心10min，弃上清，RNA沉于管底。 
9．按1ml 75%乙醇/ml Trizol加入75%乙醇，温和振荡离心管，悬浮沉淀。 
10．4℃ 8000g离心5min，尽量弃上清。 
11．室温晾干或真空干燥5-10min。 注：RNA样品不要过于干燥，否则很难溶解。 
12．可用50ul H2O，TE buffer或0.5%SDS溶解RNA样品，55-60℃5-10min。 
注：H2O、TE或0.5%SDS均须用DEPC处理并高压。 
12、测O.D值定量DNA浓度。 
注：1）此方法提取RNA A260/A280值在1.6-1.8之间。 
2） 产率估计：组织标本：（ug RNA组织）1-10ug，培养细胞（ug RNA/106 Cell）：5-15ug。 
注：1、组织或细胞量过少，可酌情减少Trizol用量。 
2、组织或细胞用量过多，会引起DNA对RNA的污染。 
3、高蛋白，脂肪或多糖类组织，肌肉组织或块状植物组织等，组织匀浆或液氮研磨 
后须4℃ 1200离心10min去掉不溶物，再进行下面操作，若顶层有脂肪物，则 
也须去掉。 
4、热天提RNA，带手套是必须的，手是RNase的主要来源。 
5、组织块用液氮研磨，****，若没有液氮或电动匀浆器，可用手动匀浆器代替， 
此时组织块不宜过大，且需先用眼科剪将组织绞碎，然后再充分研磨。 

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