Worthington酶类主要是胶原酶类,胰蛋白酶,木瓜蛋白酶,弹性蛋白酶,和脱氧核糖核酸酶。其温和的蛋白水解作用使该酶特别适用于制备原代细胞和次级(亚培养)细胞培养,因为它对细胞膜温和。这种蛋白酶也用作细胞分离和组织分离应用中的二级酶,通常与胶原酶一起使用。
酶的特异性:
酶的特性之一使它们作为诊断和研究工具如此重要,是它们相对于它们催化的反应表现出的特异性。一些酶表现出的特异性;也就是说,它们只会催化一种特定的反应。其他酶将特异于特定类型的化学键或官能团。
一般来说,有四种不同类型的特异性:
1、特异性——酶只催化一种反应。
2、组特异性——酶只作用于具有特定官能团的分子,如氨基、磷酸盐和甲基。
3、连接特异性——无论分子结构的其余部分如何,酶都会作用于特定类型的化学键。
4、立体化学特异性-酶将作用于特定的空间或光学异构体。
Worthington酶类已经建立了几种类型的粗胶原酶:类型1、2、3和4。
1型粗胶原酶具有胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶和胰蛋白酶活性的原始平衡。
2型含有较高相对水平的蛋白酶活性,尤其是梭菌蛋白酶。
3型含有Z低水平的二级蛋白酶。
4型被设计成胰蛋白酶活性特别低,以限制对膜蛋白和受体的损害。
Worthington胶原蛋白酶用途:
通常用于分离皮肤表皮和真皮层,留下完整的上皮层和干细胞、肝细胞和其他细胞分离应用。然而,由于所涉及的变量的多样性,应根据经验确定每个细胞/组织应用的确切隔离条件。
粗胶原酶广泛用于酶促原代细胞分离和组织解离程序。大多数研究人员要么使用粗制胶原酶制剂,例如 1、2、3 和 4 型,要么使用色谱纯化的胶原酶;后者通常与二级酶如弹性蛋白酶、透明质酸酶等结合。为了获得最佳结果,必须针对要解离的组织调整蛋白水解活性的较精确混合。不同组织的类型和有效性之间的相关性很好,但并不完mei,并且可能部分取决于使用参数和目标以及批次间的差异。