α-淀粉酶活性的测定

所需材料

1.KPO4-NaCl缓冲液；25℃时含0.01 M氯化钠的0.1 M pH 6.9。将8.71克K2HPO4溶解在500毫升H2O中。用0.1 M磷酸二氢钾（6.8克/500毫升H2O）滴定至pH 6.9。添加氯化钠至0.01 M .小心！在下面的步骤2和3中使用通风罩和搅拌器/加热板。

2.底物溶液；1%可溶性淀粉。通过加热搅拌将1克溶解在80毫升H2O中至约。90°C，冷却并将体积调节至100 ml。

3.显色试剂；44.0毫米3，5-二硝基水杨酸。通过加热并搅拌ca，将1克3，5 DNSA溶解在80毫升0.5 M NaOH中。加入30克酒石酸氢钠，搅拌直至溶解。冷却至室温，用H2O定容至100 ml。储存在琥珀瓶中。室温下稳定30天。

4.麦芽糖标准品；0.01 M .将36 mg麦芽糖一水合物溶解在10 ml KPO4-NaCl缓冲液中。

5.酶溶液。用KPO4-NaCl缓冲液将淀粉酶稀释至0.05毫克/毫升。

6.在适合于100°c加热的试管中制备以下稀释液。
 

管	磷酸亚铁锂氯化钠	淀粉酶	毫升	微米	毫升H20
1次测试	0.50	0.01毫升	-----	-----	0.40
2标准	0.5	----------	0.05	0.5	0.45

将所有试管置于25°c下。在0点时，向试管1和6中添加0.5 ml底物溶液，并孵育2分钟。通过添加1.0毫升显色试剂来停止反应。在温度块中以100°加热所有试管10分钟。冷却至室温，向每个试管中加入2.5毫升H2O。让试管在室温下静置10分钟。

7.在540 nm处读取Abs与空白的对比。绘制Abs与麦芽糖μ摩尔的关系图。确定540/μM麦芽糖的斜率。

8.计算比活度，即每毫克淀粉酶在pH 6.9时每分钟释放的麦芽糖微米25°C