AP-TAG 技术改变了细胞表面受体和配体的检测和克隆方式。本发明的本质是允许编码受体的任何分泌性多肽配体或胞外结构域的cDNA序列符合读码框地融合至pAPtag克隆载体中的人胎盘分泌性碱性磷酸酶(AP)。所得配体-AP 融合蛋白(称为 AP-body)在 293T 或 CHO 细胞中表达时,可以高水平分泌到培养基中,因此可以通过 AP 活性测定或使用抗 AP 抗体的蛋白质印迹分析轻松检测到。因此,配体-AP或可溶性受体-AP融合蛋白可以像抗体一样充当亲和剂,从而可以方便、安全和灵敏地检测和克隆其相应的细胞表面受体或配体。与传统的放射性125I标记方法不同,AP-TAG是安全的,不需要配体/可溶性受体纯化。
自发明以来,AP-TAG技术已克隆了许多重要的细胞表面受体和配体,包括Leptin、Semaphorin III、Nogo-66、IL-24、Jelly Belly的受体以及Kit、Mek4和Sek受体酪氨酸激酶的配体。
如果您正在使用通过 DD 或其他方法克隆的分泌蛋白或细胞表面分子,AP-TAG 技术可以让您进一步对这些基因进行功能表征。
AP-TAG Kit B
用于受体/配体相互作用的非放射性检测。
这种单向量系统是第三代AP-TAG技术。分泌型配体或可溶性受体可以与分泌型碱性磷酸酶(AP)在其N端或C端融合以产生“AP体"。所得的 AP 融合蛋白可以作为分泌蛋白表达,并直接用作高度敏感的亲和剂,就像抗体一样。表位标签(6xHis 和 myc)可以轻松纯化、检测和相互作用测定 (IP) AP 融合蛋白。下面列出了其他改进的功能。
AP-TAG Kit A
用于受体/配体相互作用的非放射性检测。
这是使用 pAPtag-2 和 pAPtag-4 载体的第二代 AP-TAG 技术。分泌型配体或可溶性受体可以与分泌型碱性磷酸酶(AP)在其N端或C端融合以产生“AP体"。所得的 AP 融合蛋白可以作为分泌蛋白表达,并直接用作高度敏感的亲和剂,就像抗体一样。