关于流式细胞分析的指南

流式细胞分析是一项实验室细胞分析技术。回顾流式细胞分析基本概念、免疫检测方法、流式细胞分析方案主要步骤和适当的对照有助于确保流式细胞分析的准确性。后文提供了一些有助成功开展流实验的要点。

一、什么是流式细胞分析

流式细胞分析是一种可根据细胞物理和荧光特性，鉴定和/或分选异质悬浮细胞群的强大技术。这是一种单细胞分析方法，非常适合同时获取大量细胞的单细胞水平定量信息，包括给定类型细胞数目和细胞内特定蛋白含量。

流式细胞分析的部分优势包括快速、可在研究异质细胞群时区分不同细胞亚群的差异，同时支持分析异质性细胞群的亚群。流式细胞分析常用于免疫分型和免疫肿瘤学研究，可分析血液、骨髓和其他样品类型的血液学差异。

二、流式细胞分析工作原理

流式技术依靠流体动力聚焦技术使细胞悬液样品形成一股单细胞液流，通过激光束。根据细胞对入射光线的散射情况，可每秒数千颗粒的速率，检测细胞大小和胞内复杂情况。随后即将生成的模拟数据转化为数字数据，进行定量和绘图分析。

根据流式细胞测定结果，可确定特定的细胞群和其亚群并通过细胞分选法物理分离，此时会根据细胞的荧光特性控制其电荷大小，从而实现细胞颗粒的静电偏转。如需更精细地鉴定亚群，则要使用探针。贴壁细胞和实体组织成功分离并制成单细胞悬液后，也可采用该技术进行分析。

三、传统流式细胞仪组件

关于流式细胞分析的低配置，即使是最基础的单激光流式细胞仪，一般都会配置至少同时检测4种荧光染料的滤光片。目前，单次实验中最多甚至可区分18种波长的光线。

传统流式细胞组件包括：

1.用于样品处理和细胞分选的液流系统

流动室：样品中的细胞通过流体动力学聚焦并流经激光照射区。

2.用于荧光检测的光学系统

光通过一系列镜片和滤光片。

根据大小、内部复杂成分和信号强度检测细胞。

3.用于信号处理、计算机显示和分析的电学系统

光电倍增管将光信号转换为电信号。

信号随后放大和数字化。