对细胞进行铺板要进行哪些操作

　　细胞铺板是细胞实验中最常见又必须掌握的一门技术，看似简单，然而却经常遇到如细胞居中或者中间稀疏等不均匀分布的现象，结果就是只能整板扔掉，重新铺板，既耽搁时间又浪费了细胞及培养板等资源。所以在进行细胞铺板的时候应该注意哪些事情。

　　细胞居中和细胞边缘化

　　从经济和高效的角度来说，需要根据实验目的选择不同规格的培养板。如在进行药物对待测细胞半抑制率(IC50)测试时，通常使用96孔板，一方面可以设置浓度梯度；另外还可一次性测多个药物，减少实验误差。

　　收集细胞要混匀

　　消化后的细胞一定要充分混匀，要把聚在一起的细胞团充分地吹打开，最好是单个的状态，但同时又不能损伤细胞，可以用玻璃吸管的移液器操作。离心也很有讲究，一般用1000 rpm/min即可。离心力太大细胞容易抱团！然后悬浮离心后的细胞团时，先不要把所有液体都加进去！一般先加2mL液体，然后用1mL移液器轻轻将细胞吹起，细胞要像云雾一样散开，这样易于形成单细胞。象下图所示的这种移液器就非常好用。

　　接种细胞须小心

　　铺6孔板，12孔板或24孔板，先在每个孔里面加1mL的培养基，晃动使之铺匀整个孔底，然后加入1 mL的细胞悬液。从孔的左边靠近底部慢慢加入，这样细胞悬液会平铺在整个孔底，细胞分散较均匀，注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。

　　轻轻敲打勿抱团

　　细胞悬液加完后，将细胞培养板抬高，对着灯光，从底部往上看，看细胞有没有抱团。如果有抱团的话，用手指从底部轻轻敲打，使之分散。也可以用平板振荡器稍稍振荡一下，效果不错。参数要设置成振幅小而频率高。

　　十字交叉要水平

　　观察和敲打后放入培养箱，然后画“十字”，就是把细胞培养板贴着培养箱搁板，前后方向来回晃动10次，再左右方向晃动10次，正好是一个“十” 字形。然后就让它静静地呆在培养箱搁板上，没事不要去动它。这里要注意的是，托架应该装在四根立柱相同高度的孔上，培养箱的搁板要水平校正，尽量地做到水平。搁板会向一个方向倾斜，对于贴壁时间长的细胞，就算当时混匀了，放进培养箱后也摇匀了，但是重力作用下细胞也会向一侧聚集。 培养箱里面或者外面尽量不要放可以产生振动的仪器，比如蠕动泵、离心机、涡旋器一类的仪器。这些仪器产生的振动对细胞贴壁有影响，也可能会导致细胞贴壁不均匀。